Психофармакология и биологическая наркология, Том 7, № 4 (2007)

advertisement your ad here

Изучение ингибирующего ГМГ-КоА-редуктазу эффекта симваглизина in vitro на модели микросомальной фракции печени крыс

В. А. Вавилин, Н. Ф. Салахутдинов, Ю. И. Рагино, Е. М. Стахнева, Г. А. Толстиков, В. В. Ляхович, Ю. П. Никитин

Абстракт


Вавилин В.А., Салахутдинов Н.Ф., Рагино Ю.И., Стахнева Е.М., Толстиков Г.А., Ляхович В.В., Никитин Ю.П. Изучение ингибирующего ГМГ-КоА-редуктазу эффекта симваглизина in vitro на модели микросомальной фракции печени крыс. Матер. III съезда фармакологов России. Психофармакол биол наркол 2007 Спец Вып; 7 (Ч 1, А–Л): 1-1629–1-1630 (Тез 107)

Одним из современных подходов к созданию новых лекарств является комплексирование известных фармакологических соединений с природными комплексонами, в частности, с глицирризиновой кислотой (ГК).
Цель исследования — изучение ингибирующего эффекта на активность ГМГ-КоА-редуктазной реакции in vitro нового соединения симваглизин (СВГ), представляющего собой комплекс симвастатина (СВ) с ГК (1 ÷ 4). В экспериментах использовалась модель нативных микросом, выделенных методом дифференциального ультрацентрифугирования, из гомогената печени самцов крыс Wistar. Метаболизм ГМГ-КоА-редуктазной реакции в микросомальной фракции проводился в фосфатном буфере pH 7,0 при температуре 37 °С в присутствии меченного субстрата (3,3-ГМГ-[3–14C]-КоA), НАДФН-генерирующей системы в избытке и разных концентраций ингибиторов. Реакция останавливалась добавлением 4,3 М HCl. Через 1 ч образования лактона мевалоновой кислоты pH нейтрализовывалась KOH. Перед основным этапом анализа количества образовавшегося продукта реакции методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) были откалиброваны немеченый и меченный стандарты субстрата реакции. Разделение продукта и субстрата 3-ГМГ-КоА-редуктазной реакции проводили методом ион-парной обращеннофазной ВЭЖХ. Условия проведения хроматографии были подобраны для обеспечения короткого времени удерживания мевалоната (4–8 мин) и длительного времени удерживания 3-ГМГ-КоА (23,2–24 мин) для их базового разделения. Детекция образовавшегося продукта реакции — лактона мевалоновой кислоты — проводилась в диоксановом сцинтилляторе на бета-счетчике. Показано, что СВГ является ингибитором/проингибитором ГМГ-КоА-редуктазной реакции в синтезе холестерина (ХС) и для приобретения свойств ингибитора нуждается в цитохром Р450-зависимой активации с образованием активного метаболита(ов). Определение типа и константы ингибирования было проведено с использованием двух концентраций субстрата, равных 28 и 47 мкМ, и четырех концентраций СВГ, равных 75, 150, 300 и 600 нМ. Выявлено, что ингибирующий эффект СВГ является подобным собственно СВ и не уступает ему в силе ингибирования. Так, при концентрации 300 нМ (рассчитанной для обоих соединений с учетом молярного веса и вклада СВ в общий молярный вес СВГ), соответствующей диапазону константы ингибирования СВ 100–300 нМ, оба соединения оказывали равный эффект и подавляли ГМГ-КоА-редуктазную реакцию на 33,3–45 % (СВ) и 37,7–42 % (СВГ). Анализ типа ингибирования графическим методом Корниш–Боудена дал величину Ki = 94,18 нM. Анализ кривых ингибирования графическим методом Диксона указал на бесконкурентный тип ингибирования особенно при исключении высоких концентраций ингибитора при низких концентрациях субстрата. Полученные результаты свидетельствуют о том, что СВГ снижает и Km и Vmax синтеза мевалоната, что доказывает его ингибирующий эффект в отношении ГМГ-КоА-редуктазной реакции, приводящий к ингибированию синтеза ХС в микросомах печени крыс in vitro. Работа поддержана грантом ФЦНТП Минпромнауки РФ, тема № ИБ-37/02 по государственному контракту № 43.004.11.2535. 2004. и Интеграционным проектом СО РАН и СО РАМН № 53, 2006–2008 гг.


This work is licensed under a Creative Commons Attribution 3.0 Unported License. Online ISSN 2070–5670Print ISSN 1606–8181CD ISSN 1999–7337